Haralabia BOLETI & Penelope MAVROMARA
Laboratoire de Virologie Moléculaire, Institut Pasteur Hellénique, 127 avenue
Vassilissis Sofias, ATHENES, Grèce
Le virus d’hộpatite C (HCV), initialement tenu responsable d’occasionner l’hộpatite non-A et non-B, est devenu une cause importante de morbiditộ et de mortalitộ, avec un taux d’infection estimộ à 170 million de personnes à l’ộchelle mondiale. Bien qu’indiffộrenciable des autres types d’hộpatites virales, l’infection aiguở d’hộpatite C risque fortement de devenir chronique. Un quart des sujets infectộs finira par dộvelopper une infection chronique avec risque plus important de cirrhose du foie ou de carcinome hộpatocellulaire. Malgrộ le dộfi important que pose le HCV à la santộ publique, compte tenu de ses modes de transmission et de diagnostic, il n’existe pour l’heure aucun vaccin, alors que les traitements disponibles demeurent inefficaces. Dans le souci de proposer de nouvelles approches thộrapeutiques et de mettre en œuvre des vaccins, il s’impose de comprendre la base molộculaire de la pathogenốse HCV, tributaire de la fonction de chacune des protộines virales, ainsi que leur interaction avec l’ensemble de la cellule-hụte. Notre travail cible la caractộrisation biochimique et fonctionnelle de la protộine NS4B, une protộine non-structurale du virus HCV.
La protộine NS4B (27 kDa, 262 a.a, pour les gộnotypes HCV 1a et 1b) est une protộine non-structurale pour laquelle nous disposons actuellement de trốs peu de donnộes biochimiques et d’information fonctionnelle. Pour ộtudier cette protộine, nous avons dans un premier temps produit et caractộrisộ un nombre de rộactifs intộgrant des polypeptides NS4B recombinantes, des anticorps spộcifiques anti-NS4B, et des systốmes d’expression aptes à assurer l’expression de la NS4B dans des cellules de culture de tissus mammifốres d’origine hộpatique et lymphocytique, et dans le but de mimer le milieu intracellulaire in vivo dans lequel se multiplie le HCV. La protộine NS4B s’est exprimộe seule ou dans le contexte d’autres protộines HCV non-structurales. Des ộtudes de transfection transitoire, ont rộvộlộ que la NS4B est bien exprimộe dans les cellules eucaryotes d’origine hộpatique dans le rộseau rộticulaire endoplasmique. En nous servant d’un anticorps polyclonal anti-NS4B que nous avons produit, nous avons pu confirmer cette localisation par la technique de microscopie d’immunofluorescence. Par ailleurs, la protộine NS4B s’exprime dans des cellules de transfection stable, en utilisant un systốme d’expression mammifốre rộglementộ (T et on/off Clontech ou ecdysone inducible). L’expression de la NS4B par un systốme permettant le contrụle de ses niveaux d’expression nous mốnera à maợtriser un problốme de toxicitộ potentiel et à favoriser nos ộtudes fonctionnelles s’agissant de l’effet de concentration de l’expression de la NS4B sur la viabilitộ cellulaire, sur la progression du cycle cellulaire et sur l’organisation des membranes intracellulaires. Les progrốs atteints dans ce domaine de recherche ainsi que ses perspectives à venir feront l’objet de nos discussions
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